吡咯烷酮的pH值和溫度對(duì)PVP水溶液的影響,起到細(xì)胞保種的作用。適當(dāng)?shù)牟僮骱秃线m的凍存條件可以減少細(xì)胞特性的改變或丟失,未交聯(lián)的PVP溶液沒有特殊的觸變性,除非濃度高時(shí)才會(huì)有觸變性,并顯示很短的松馳時(shí)間。細(xì)胞凍存經(jīng)驗(yàn)談:選對(duì)凍存工具才是王道,細(xì)胞凍存是將細(xì)胞儲(chǔ)存在低溫環(huán)境中,減少細(xì)胞代謝,實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù)。(吡咯烷酮)在大多數(shù)細(xì)胞系中,PVP的增稠性能與其相對(duì)分子質(zhì)量密切相關(guān),在給定濃度的條件下,相對(duì)分子質(zhì)量越大,其黏度也越大。細(xì)胞會(huì)隨著衰老和演化不斷的積累改變,造成表型和基因型的“培養(yǎng)漂移”,正確且成功的凍存對(duì)于細(xì)胞的長(zhǎng)久應(yīng)用起著重要的作用。
在凍存過程中,因而,正確的培養(yǎng)和溫和的細(xì)胞收集,在凍存前,細(xì)胞應(yīng)保持 佳的生長(zhǎng)狀態(tài)(處于對(duì)數(shù)期或指數(shù)期),理想情況下,培養(yǎng)基應(yīng)在收獲前24h更換。建議對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行微生物污染物,特別是支原體,確保細(xì)胞沒有污染。在細(xì)胞的收集過程中,實(shí)驗(yàn)操作要盡可能的溫和,避免細(xì)胞受損。(吡咯烷酮)適當(dāng)?shù)牡蜏乇Wo(hù)劑,目前,細(xì)胞凍存 常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法,主要采用加適量保護(hù)劑的緩慢冷凍法凍存細(xì)胞,減少在冷凍過程中對(duì)細(xì)胞的損害。細(xì)胞在不加保護(hù)劑的情況下直接凍存,細(xì)胞內(nèi)外的水分會(huì)很快形成冰晶,從而引起一系列不良反應(yīng)。
聚乙烯基吡咯烷酮、乙二醇、甲醇和甲基乙酰胺等都是低溫保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中 常見的是二甲基亞砜(DMSO)和甘油,這兩種物質(zhì)分子量小,溶解度大,易穿透細(xì)胞,可以使冰點(diǎn)下降,提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,關(guān)鍵在于對(duì)細(xì)胞性。(吡咯烷酮)DMSO通常濃度為5 - 10% (v/v), 佳濃度隨細(xì)胞系的不同而不同。甘油在冷凍介質(zhì)中的 終濃度為5 - 15%,同樣, 佳濃度取決于細(xì)胞系。為了提高較難保存的細(xì)胞的存活率,凍存時(shí)可以選擇增加保存液中的血清濃度。想要凍存細(xì)胞更快更穩(wěn),細(xì)胞凍存液會(huì)是不錯(cuò)的選擇,無需配制,直接在細(xì)胞中加入適量的凍存液即可,操作簡(jiǎn)單,就能擁有高活率的細(xì)胞。